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异硫氰酸胍|593-84-0|裂解液使用中的问题解析

2017-3-1
DNA提取
        异硫氰酸胍是强用力的蛋白质变性剂,既能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离,又对RNA酶有强烈的变性作用。因此,异硫氰酸胍可用于变性剂裂解细胞,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。然而,在异硫氰酸胍溶液的配制和使用中,经常会遇到一些问题,本文将对这些问题进行一一总结。
异硫氰酸胍溶液是否需要现用现配?
       提取试剂以异硫氰酸胍的终浓度为4M为例:先以42mM柠檬酸钠、0.83%N-lauryl sarcosine(十二烷基,N-甲基甘氨酸钠)、0.2mM β-巯基乙醇制得CSB缓冲液;异硫氰酸胍25g、CSB缓冲液33mL,混合直至完全溶解,可加热在65℃助溶,制得变性液,4℃保存备用。
        所以,异硫氰酸胍溶液可以不必非要现用现配,而且目前市场上也有不同浓度的溶液销售,但放置时间不易过长,否则会有沉淀析出,在使用前需要仔细检查;另外,如果一次性配制过多,建议进行分装。
异硫氰酸胍溶液配制好之后是否需要灭菌?
        异硫氰酸胍溶液并没有必要灭菌,该溶液并不是非常稳定,而且配裂解液一般要用0.1%的DEPC水,水已经进行过灭菌。另外提取RNA的所有试剂在配制时都需要用DEPC水配制,而且试剂最好为新开启并作为RNA专用。
        虽然配制好的裂解液不需要灭菌,但要注意的是,实验中所用到的塑料制品,已经标明Rnase-Free的,如果没有开封使用过,可以直接使用,其他的都必须经过处理:在双蒸水中加入DEPC,使其终浓度为0.1%,将塑料制品浸泡其中,通风厨过夜,之后再用铝箔封住,高温高压灭菌至少30min,干燥备用。
异硫氰酸胍的毒性如何?
        吸入,摄入,皮肤接触异硫氰酸胍均可造成损伤,所以操作时需穿好实验服,戴好手套和护目镜;其与酸接触可释放极高毒性气体,对水生生物有害,可能对水体环境产生长期不良影响,因此应避免释放至环境中。
使用过后的废液如何处理?
        实验室的污染主要有生物性污染和化学污染,按形态大致可分为废水、废气和固体污染物。其中,生物污染包括生物废弃物污染和生物细菌毒素污染,而化学污染包括有机物污染和无机物污染。总体来说,各类废液需进行分类,原则上原瓶回收,如需混装,则需确定试剂混合后不产生热量、有毒气体、爆炸等。回收瓶上也需注明药品名称、浓度,进行统一回收处理,不可随意丢弃,造成环境污染和毒害。
        随着分子生物学的快速发展,基因诊断成为检测最准确而有效地手段,进行基因诊断的过程中,病毒核酸的提取是进行检测的前提条件,核酸提取的质量也影响检测的准确性,而裂解液品质的好坏直接影响到核酸提取的质量,进而影响到实验的结果。异硫氰酸胍溶液作为最常用的细胞裂解液,只有处理好每一个细节,才能够在安全实验的基础上获得最好的实验结果。
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