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Tris(77-86-1)在植物蛋白质提取中的应用

2017-8-7
 
植物蛋白提取

        蛋白质组学即从蛋白质组的水平进一步认识生命活动的机理和疾病发生的分子机制,而在蛋白质组学的研究中,蛋白质的提取是最基础也最关键的环节之一,Tris是植物蛋白质提取中常用的试剂,方法包括Tris-HCl法、酚法、Tris-丙酮-酚法。本文将对这几种方法进行分析总结。
 
Tris-HCl法
 
        Tris-HCl法提取的蛋白图谱效果比用TCA丙酮法提取的效果好。TCA丙酮法所提取蛋白在小分子量区域分布不均匀,蛋白点不清晰,水平条纹与竖直条纹较为严重,而Tris-HCl法克服了上述缺点,并分离出TCA丙酮法所不易分离出的酸性蛋白,除分离到较多的中等分子量的蛋白质外,还能得到很多的高分子量和低分子量蛋白质。
 
        Tris-HCl法操作简便,时间较短,成本适中,提取步骤简单,蛋白质损失少,实验结果重复性好。
 
酚法
 
        酚法利用了Tris-饱和酚的特性:酚是蛋白质的良好溶剂,在样品制备过程中,蛋白质和脂类溶于酚相,盐、核酸、多酚和多糖等可溶性物质进入水相;通过增加离心力和离心时间,可以尽可能地把密度大的糖离至上清液的上层;酚相中的蛋白质通过乙酸铵的甲醇溶液沉淀,再用冷丙酮多次清洗蛋白,可以去除色素和铵离子等杂质。
 
        该方法在处理含有大量干扰物质的植物样品中非常有效,但这种方法相对复杂,耗时长。
 
Tris-丙酮-酚法
 
        将TCA丙酮法与酚法结合后用于提取蛋白,融合了TCA丙酮沉淀法和酚法的优点。先用含有乙酸铵的甲醇溶液清洗残留的TCA并提升溶液的pH到7.0以上,再使用酚和SDS的混合物来溶解蛋白。酚-SDS联合提取比酚、SDS缓冲液单独提取更有效。Tris-丙酮-酚法在很多植物的蛋白提取上都取得了非常好的效果,而且电泳图谱背景和条带都很清晰,蛋白质点多,可广泛应用于植物的叶片和果实中蛋白质的提取。
 
        该提取方法非常省时,提取的总时间在1h左右,大大缩短了传统方法提取蛋白所需的时间。
 
        对于植物蛋白的提取,不仅样品多样,而且每种植物所含有的成分也不同,其中的干扰因素也多,所以没有一种方法可以适用于各种样品。在实验中,首先要明确目的,是获得一种目标蛋白还是获得所有蛋白,然后再根据样品特点来选择提取方法,进行摸索优化。
 
相关链接:Tris
                    细胞和组织中总蛋白的提取
 

本文由苏州亚科科技股份有限公司编辑