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Tris和Bicine缓冲液对ULPs体外性质的影响

2017-8-29
        尿酸酶是生物体内嘌呤代谢途径的重要酶,可催化氧气和尿酸,以避免血液中过量积累的尿酸导致的痛风、高尿酸血症等。尿酸酶脂质体(ULPs)通过将药物包裹在类脂双分子层中,克服了其它尿酸酶制剂的缺点,稳定性好、安全性高,并具有一定的靶向和缓释作用[1,2]。但是在制备过程中,其性能会受到缓冲液体系的影响。Tris-HCl和Bicine-NaOH是最常用的两种缓冲液,本文将就二者对ULPs体外性质的影响进行总结。
Tris-HCl和Bicine-NaOH的优点
        Tris-HCl缓冲液是一种常用于生化实验中的缓冲体系,并广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,具有对生物化学过程干扰很小的优点;Bicine-NaOH缓冲液属于Good’s缓冲液体系,具有不参加和不干扰生物化学反应过程,可耐化学作用和酶解作用等优点。因此,二者常常用于细胞、蛋白等生化实验中。
尿酸酶脂质体的制备方法
        逆向蒸发法是一种非常适用于包封水溶性大分子物质的脂质体制备方法。该制备方法所得的脂质体包封率高,颗粒均匀,稳定性良好,制备方法简单[3]。称取一定比例的卵磷脂和胆固醇置于圆底烧瓶中,加一定量的氯仿充分溶解后,于旋转蒸发仪上减压除去氯仿,形成均匀薄膜。加入乙醚重新分散后,再加入pH=8.5的含2mg的尿酸酶的Tris-HCl缓冲液。冰浴超声,形成均匀带乳光分散体系后,减压旋蒸,至凝胶塌陷,形成均匀乳白色带乳光液体。加入Tris-HCI缓冲液,经0.22μm滤膜过滤,制得ULPs样品。同样方法制得以Bicine-NaOH为缓冲液的ULPs样品。
尿酸酶脂质体的体外性质对比
       包封率:采用凝胶柱法测定尿酸酶脂质体的包封率,发现使用Bicine-NaOH缓冲液制备所得的脂质体包封率高于以Tris-HCl缓冲液所制备的样品;
       活性:在尿酸浓度为75gmol/L的Boric acid-Borax缓冲液中测定尿酸酶脂质体的活性,发现Bicine-NaOH缓冲液所制得的尿酸酶活性高于以Tris-HCl缓冲液所制备的样品;
       稳定性:将尿酸酶脂质体避光密封贮存于4°C下,于指定时间取出测定样品中尿酸酶的活性,发现使用Bicine-NaOH缓冲液制备的尿酸酶脂质体的贮存稳定性更优。
        综上所述,在制备尿酸酶脂质体的过程中,Bicine-NaOH缓冲液优于Tris-HCl缓冲液,更能提高ULPs的包封率,以及尿酸酶在体外的活性和稳定性,因此推测其临床给药也将带来更好的治疗效果。
参考文献
[1] 周云莉,何丹,张敉,等. 用Bicine-NaOH缓冲液制备的尿酸酶复合纳米脂质体中尿酸酶的生化特性. 华西药学杂志, 2015, 30: 543-546.
[2] 重庆医科大学. 尿酸酶脂质纳米粒及其制备方法. CN101816630A, 2010.
[3] 张敉. 缓冲液种类对尿酸酶脂质体影响的初步研究. 硕士论文, 重庆医科大学, 2014.
相关链接:Tris
                
Tris-HCl
                
Bicine
                
Bicine-Na
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