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BCIP/NBT显色液的制备

        BCIP/NBT是碱性磷酸酶的底物组合之一,用来检测与硝酸纤维素或其它膜相结合的抗原。在碱性磷酸酶(AP)的催化下,BCIP被水解产生强反应性产物,该产物与NBT反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色产物。其相应的试剂盒可用于碱性磷酸酶体系的IHCWB实验的酶促显色。在AP的催化下,在组织切片或印迹膜上结合了AP偶联物的地方产生深蓝色沉淀,可根据颜色反应来确定目标蛋白的位置及表达情况。下面简要介绍下BCIP/NBT显色液的制备方法:

(一)、BCIPNBT溶液及缓冲液的制备

1.  1LTris缓冲液(0.1 M Tris0.5mM的氯化镁,pH=9.5 

  12.1 gTris0.12 g的六水氯化镁加入800 ml的经过蒸馏及去离子处理的水(dd H2O)中。然后在用盐酸调节pH9.5,最后加入dd H2O得到1LTris缓冲液。

2. NBT溶液

   0.7 mlDMF0.3 mldd H2O混合得到1 ml70%DMF的溶液,然后在其中溶解30 mgNBT

3. BCIP溶液

   15 mgBCIP加入1 mlDMF中得到BCIP溶液。

(二)制备BCIP/NBT显色溶液

  将上述制备得到的NBT溶液和BCIP溶液相混合加入到100 ml Tris缓冲液就得到相应的显色溶液。

 

相关链接:BCIP

                  NBT 

本文由苏州亚科科技股份有限公司编辑