四川大学开发出基于TMB的快速可视化核酸检测平台

核酸检测（nucleic acid tests, NATs）在疾病诊断和监测领域具有不可或缺的地位,在此次疫情中更是发挥了不可替代的作用。但开展核酸检测，一般须具备有专业的分子实验室及配套的检测设备。而目前常态化疫情防控形势下,扩大核酸检测范围等措施的开展，需要更便捷、检测时间更短、成本更低、准确率和安全性更高的核酸检测方式。

近日，四川大学李峰课题组与吴鹏课题组合作，报道了一种使用DNA嵌入染料（DNA intercalating dyes, DIDs）进行比色核酸检测和定量的方法，称之为快速光激活底物显色技术（FLASH），然后通过与PCR集成，设计了一种新型可视化核酸快速检测平台：FLASH PCR。

研究团队以前的研究表明，染料嵌入DNA后也能产生单线态氧，从而使传统的荧光DIDs转换成type-II型光敏剂。基于此，研究人员开发出了快速光激活底物显色技术（FLASH），该技术可快速光氧化显色底物，产生比色信号读出。

研究人员以SYBR Green I (SG-I) 为光敏剂，以3,3,5,5 -四甲基联苯胺（TMB）为显色底物，将PCR扩增子与这两种化合物直接混合，然后再进行光照完成FLASH反应，将FLASH系统与PCR结合，能够成功将基于DID参与的荧光PCR转化为比色PCR，开发出比色FLASH PCR。

并且研究人员通过制造的两个读出平台：便携式电子FLASH阅读器和纸质FLASH条，验证了FLASH PCR在POC诊断中的实际适用性。

总之，FLASH PCR具有简易性和灵活性，未来，FLASH技术将实现分散环境下快速、稳健且灵敏的核酸检测，从而为即时诊断以及资源有限地区疾病诊断产生真正实用的帮助。

参考文献：Tianyu Dong, Hayam Mansour, Hao Hu, Guan A. Wang, Colton J. F. Watson, Michael Yousef, Gabriela Matamoros，et al.Colorimetric Polymerase Chain Reaction Enabled by a Fast Light-Activated Substrate Chromogenic Detection Platform.Anal. Chem., 2020, 92, 6456–6461, DOI: 10.1021/acs.analchem.9b05591