1 实验部分

    1．1 主要仪器与试剂

    1229型毛细管电泳仪，配有紫外检测器．检测波长214nm(北京新技术研究所)；未涂层石英毛细管柱(50μm内径，总长60cm，有效长度50cm，河北永年光导纤维厂)；工作电压为14kV，压差进样(高度10cm，时间5s)，背景电解质为pH 8.5 50mmol／L 硼砂缓冲溶液(用O.1mol／L HC1和O.1mol／L NaOH 调pH)；毛细管使用前用O.1Omol／L NaOH、水和电泳缓冲溶液依次冲洗5min，每次电泳后用电泳缓冲溶液冲洗5min。

    左旋多巴和羟苄丝肼(盐酸盐)对照品(Sigma公司)；美多芭片剂(上海罗氏制药有限公司，批号SH 0109)，其他试剂为分析纯，实验用水为二次石英蒸馏水。

    1．2 标准溶液的制备

    准确称取一定量左旋多巴和羟苄丝肼(盐酸盐)，用O.1mol／L HC1溶解定容，使左旋多巴和羟苄丝肼浓度分别为4.0mg／mL和2.0mg／mL，使用前用O.1mol／L HC1稀释，并用O.45μm醋酸纤维滤膜过滤。

    1．3 样品溶液的制备

    将5片美多芭片在研钵中研成细粉，混匀。准确称取大约0.50g粉末于50mL烧杯中，加入20mL 0.1mol／L HC1，放置4h，期间超声4次，每次20min。然后抽滤，滤液用O.1mol／L HC1定容至50mL。使用前用O.1mol／L HC1稀释并用O.45μm醋酸纤维滤膜过滤。

    2 结果与讨论

    2．1 缓冲溶液的选择

    电泳缓冲溶液的组成、浓度和pH是影响电泳分离的重要因素，缓冲溶液pH可以影响zeta电势、电渗流(EOF)和分析物的带电情况，进而影响分析物的迁移时间和分离。缓冲溶液浓度影响溶液的粘度系数、分析物的扩散系数、zeta电势和毛细管的表面，不仅可以影响分析物的分辨率和迁移时间，而且可以影响峰电流。实验了硼砂-HC1、硼砂-NaH2PO4、硼砂-硼酸体系，结果表明，硼砂-HC1体系效果最佳。同时，分别实验了缓冲溶液浓度相同而pH不同和pH相同而缓冲溶液浓度不同时电泳行为的变化。实验结果所示，随着pH从7.0增加到9.0，缓冲溶液浓度从10mmol／L增加到80mmol／L，左旋多巴和羟苄丝肼迁移时间增加，分离度增加。同时，随着缓冲溶液浓度增加，焦耳热效应作用明显，基线噪音增加，柱效有所降低。在保证一定柱效和分辨率的前提下保持一定分析速度，宜选择pH 8.5 50mmol／L的硼砂-HC1缓冲溶液。

    2．2 分离电压和进样时间的影响

    分离电压直接影响迁移时间和分辨率，分离电压增加，迁移时间降低，分离速度提高，但过高的分离电压会造成基线噪音增加，影响分离度。同时，分离电压的增加还会使分析物的峰面积降低。分离电压降低，迁移时间增加，分辨率增加，但分离电压过低会造成峰展宽，造成分离效率下降。实验了10～20kV的分离电压，结果随着分离电压增加，迁移时间减少，分离速度提高，但分离度下降。综合考虑分离度和分析速度两方面因素，选择14kV的分离电压。进样时间决定进样量，影响峰电流和峰形。随着进样时间的增加，峰电流增加，但进样时间超过一定量后峰展宽将变得严重，因此在保证一定灵敏度的前提下应该尽量选择短的进样时间。实验了2、5、6、8和10s的进样时间，实验表明随着进样时间的增加，峰高逐渐增加。但进样时间超过5s后峰电流增加缓慢，峰形变宽，柱效降低，本文选择5s的进样时间。

    2．3 线性范围、重现性和检出限

    在优化的实验条件下，对一系列左旋多巴和羟苄丝肼对照品混合溶液进行测定，左旋多巴和羟苄丝肼的浓度和峰高分别在0.06～1.0mg／mL和0.05～0.90mg／mL范围内呈线性关系，回归方程分别为Y(mV)=41.27x+0.2042(mg／mL)和Y(mV)=54.73x-0.0337(mg／mL)，线性相关系数分别为0.9974和0.9987。利用含有左旋多巴和羟苄丝肼各0.50mg／mL的标准混合溶液连续进样l1次，测得左旋多巴和羟苄丝肼的迁移时间和峰高的精度分别为1.4％、1.1％和3.7％、3.4％。根据3倍噪音法求得检出限分别为0.021和0.017mg／mL。

    2．4 样品分析

    分别取lmL样品溶液5份，稀释到5mL，按优化好的实验条件分别测定羟苄丝肼和左旋多巴的含量。

    3 结论

    通过优化缓冲溶液DH和浓度、分离电压和进样时间等条件建立了毛细管电泳分析美多芭片剂中左旋多巴和羟苄丝肼的方法，实际样品分析结果表明该方法快速、准确、可靠，有望成为该类药物质量控制的一种有效分析方法。

参考文献：

[1] Coello J，Maspoch S，Villegas N．Simultaneous kinetic-spectrophotometric determination of levodopa and benserazide by bi-and three-way partial least square calibration[J]．Talanta，2000，53(3)：627—637．

[2]邓延倬，何金兰．高效毛细管电泳[M]．北京：科学出版社．1995．26．

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