DNase I, RNase-free

Features
· 基因重组酶。
· 以低剂量的内源核糖核酸酶从非动物来源的宿主中纯化。
 

Applications
· 制备不含DNA的RNA (1)。
· 体外转录后，除去模板DNA (1)。
· RT-qPCR，RT-PCR前，制备不含有DNA的RNA模板 (2)。
· 在DNA Polymerase I协同作用下，缺口平移标记DNA (1)。
· DNase I (RNase-free)足迹分析方法研究DNA和蛋白的相互作用(1)。
· 产生含有随机重叠DNA插入的基因文库，反应缓冲液中含有Mn2+ (3)。
 

说明
DNase I (RNase-free) 是一种内切酶，可切割单链和双链DNA。该酶水解磷酸二酯键，产生具有5’ -磷酸和3’-OH基团的单核苷酸和寡聚脱氧核糖核苷酸。
酶活性严格依赖于Ca2+，受Mg2+ 和Mn2+ 离子激活，见图1：
– Mg2+离子存在时，DNase I按统计学意义的随机方式在dsDNA任意单链的不同位置独立切割(1)；
– Mn2+离子存在时，DNase I几乎在双链DNA 的相同位置切割，产生平末端的DNA片段或者具有1-2个碱基突出末端的DNA片段(1)。
 
来源
E.coli cells with a cloned gene encoding bovine DNase I.
 
分子量
29 kDa，单体。
 
活性单位定义
1个活性单位是指在37°C、10分钟内完全降解1?μg质粒DNA所需的酶量。
酶活性分析混合物：40 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgSO4, 1 mM CaCl2, 1 µg pUC19 DNA.
1个DNase I活性单位大致相当于0.3个Kunitz unit (4)。
 
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
50 mM Tris-acetate (pH 7.5), 10 mM CaCl2和50% (v/v)甘油。
 
10X 反应缓冲液，含MgCl2
100 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 25 mM MgCl2, 1 mM CaCl2。
 
10X 反应缓冲液，无MnCl2
100 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 1 mM CaCl2。MnCl2在1X反应缓冲液的推荐浓度为10 mM。
 
质量控制
通过相关质量测试表明不含核糖核酸酶。通过在体外转录后降解DNA模板的测试。
 
抑制与失活
· 抑制剂：金属螯合剂、毫摩尔浓度的过渡金属(如Zn)、SDS(即使浓度低于0.1%)、还原剂(DTT和β-巯基乙醇)、超过50-100?mM的离子强度。
· 失活：EGTA或EDTA (1 mol Mn2+/Mg2+ (5)相应添加1 mol EGTA/EDTA)存在时， 65°C加热10分钟。
 
备注
DNase I (RNase-free)对物理变性处理非常敏感。混匀时轻轻颠倒试管摇匀，不要剧烈振荡。