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TRIS、盐酸胍、EDTA等试剂在核酸提取中的作用
核酸检测(实时荧光RT-PCR方法)是确诊新冠肺炎的金标准,在核酸检测的具体流程中,核酸提取是十分关键的环节。根据已公开报道,TRIS、盐酸胍、EDTA等试剂在核酸提取中发挥着重要的作用。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类,是生命的最基本物质之一。核酸提取是指利用物理、化学等方法将核酸从样品中分离出来的过程,是核酸扩增、DNA片段连接、载体构建、高通量测序等一系列分子生物学分析的前提技术,是生命科学研究、生物及时应用及基因诊断中非常重要的一项技术,因此,核酸的提取具有十分重要的意义。
一般来说,核酸提取是需要多步骤的工作,首先需要对细胞、组织材料等生物样本材料进行破碎处理,失活核酸酶,释放核酸,而TRIS、盐酸胍、EDTA等试剂的作用主要体现在释放核酸环节。
核酸(DNA、RNA)在酸性溶液中易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。而TRIS即三羟甲基氨基甲烷,PH缓冲范围:7.0-9.0,能够维持待提取样品裂解后释放的核酸的稳定性,以避免核酸的降解,提高核酸的浓度和纯度。
盐酸胍是核酸酶的强抑制剂,利于从富含RNASE的组织提取完整的RNA。盐酸胍不仅能够快速的破坏细胞膜,还能够变性蛋白质,使得蛋白质变性沉淀,从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕。
EDTA即乙二胺四乙酸,其能够与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等金属离子结合,可防止金属离子激活蛋白酶,从而减少金属离子对核酸质量的影响。
综上,TRIS、盐酸胍、EDTA等试剂在核酸提取过程中,能够充分有效地裂解细胞,使细胞中的核酸能够充分释放,得到浓度更高的核酸,有利于提高核酸的质量,保证后续操作的准确性。
参考文献:
CN109694863A用于核酸提取的裂解液、清洗液、核酸提取试剂盒及核酸的提取方法
CN110684764A用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法
核酸抽提经验及原理总结.百度文库
核酸提取常见试剂的作用原理.百度文库