DTT|CAS:3483-12-3|在蛋白质中二硫键的还原中的应用

二硫苏糖醇（化学名：DL-二硫苏糖醇，简称：DTT）是一种小分子有机还原剂。DTT主要应用在核酸提取/保护、IVD试剂盒、蛋白质中二硫键的还原、化学镀镍等领域。本周亚科股份小编介绍一下DTT在蛋白质中二硫键的还原中的应用。

近年来，糖尿病的发病率呈现出逐年上升的趋势，大量的临床实践证实，用重组人胰岛素注射液治疗糖尿病可取得理想的效果。

目前重组人胰岛素原融合蛋白复性方法存在以下技术缺陷：

(1)稀释复性：增加体积较大，变性剂稀释速度太快，不易控制，且复性时蛋白含量较低，一般2mg/mL以下，复性率在60％左右。

(2)透析复性：不适合大规模生产，无法应用到生产规模，且易形成无活性蛋白质具体。

(3)柱上复性：生产工艺复杂，且增加生产成本。

因此开发一种适于工业化生产的重组人胰岛素原融合蛋白复性方法，克服现有技术缺陷，具有重要的意义。

CN105732820B专利中提供了一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，具体包含以下步骤：

1)将表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌进行破碎，收集包涵体；

2)使用包涵体洗涤液对于包涵体进行洗涤；

3)去除洗涤液后，在包涵体里加入变性剂；

4)加入终浓度为10mM巯基还原剂（DTT），获得还原蛋白溶液；

5)将配好的复性缓冲液缓慢加入4)中的还原蛋白溶液中，轻微搅拌，进行重组人胰岛素原融合蛋白的复性，得到优化的复性蛋白溶液。

相对于现有技术，本发明针对一种重组人胰岛素原融合蛋白，复性浓度由现有技术中的0.3～2mg/mL提高至5～10mg/mL，提高复性率至80％-90％，后续工艺经简单纯化即可。本发明所采用的试剂简单易得，且各步骤操作简单，快速高效，所有操作过程在室温或4℃环境下进行，大大降低生产成本，适合工业化大规模重组人胰岛素的生产。

参考文献

CN105732820B   一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法