发光酶免疫测定 CLEIA

 发光酶免疫测定 CLEIA 

一、原理 

属于酶免疫测定的一种。只是最后一步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。

二、技术类型  

根据酶促反应底物不同可分为：

1.荧光酶免疫测定技术 

2.化学发光酶免疫测定技术 

根据免疫学反应模式分

1.双抗体夹心法和双抗原夹心法

2.固相抗原竞争法

三、技术要点 

1.抗原抗体结合反应  

将已包被了抗体的乳胶微粒和待测标本加入反应杯中，经温育一定时间后,再加入AP标记抗体，温育,形成固相包被抗体-抗原-酶标抗体复合物。

2.分离技术  

将复合物转移到玻璃纤维上，用缓冲液洗涤，没结合的抗原被洗脱，酶标抗体-抗原-胶乳微粒抗体复合物则被保留在纤维膜上。

3.酶促发光反应  

加入4-MUP，酶标抗体上AP将4-MUP分解，形成4-MU，它在360nm激发光的照射下，发出448nm的荧光，经荧光仪记录，放大，根据标准曲线由电脑计算出所测物质的含量。

四、分离技术

1.磁颗粒分离法

用抗原或抗体包被磁颗粒,与标本中相应抗原或抗体和酶标的抗体或抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过磁场将结合酶标记物IC和游离酶标记物进行分离的技术。

2.微粒子捕获法

所用颗粒是无磁性微粒子作为抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。

3.包被珠分离法

用聚苯乙稀等材料制成小珠,在小珠上包被抗原或抗体,经抗原抗体反应后,将结合状态和游离状态的酶标记物进行分离。