化学发光免疫测定技术CLIA

 化学发光免疫测定技术CLIA 

一、原理 

用化学发光剂直接标记抗原或抗体,与待测标本中相应Ab或Ag、磁颗粒性的Ag或Ab反应，通过磁场把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，然后加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性检测。

二、技术类型  

1.分离方法  

常用磁颗粒分离技术

2.免疫学反应模式 

同酶发光免疫测定技术

3.不同只是相应标记物是吖啶酯而不是酶 

三、技术要点

1.抗原抗体结合反应  

将包被McAb的磁颗粒和待测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。

2.分离技术  

在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。

3.化学发光反应  

经洗涤的磁珠中，加入H2O2和pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量成正比，按标准曲线，仪器可计算出被测物含量。

四、方法评价

1.AE其低背景噪音、化学反应简单、快速而无催化剂。

2.AE与大分子的结合并无减少所产生的光量，从而增加灵敏度，灵敏度可达10-15g/ml。

3.AE标记试剂有效期长，可达一年。

4.固相分离剂为极为幼细的磁粉，除增大包被面积，加快反应外，亦同时使清洗及分离更简易、快捷。