电化学发光免疫测定技术 ECLI

电化学发光免疫测定技术ECLI

一、原理 

是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。用化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极

上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。

二、技术类型  

1.分离方法  

常用磁颗粒分离技术

2.免疫学反应模式 

同酶发光免疫测定技术

3.相应标记物是三联吡啶钌而不是酶 

三、技术要点

1.三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本同时加入一个反应杯中孵育反应。

2.将链霉亲和素（SA）包被磁珠加入反应杯中，再次孵育，使生物素（B）通过与亲和素（A）的结合，将磁珠、Ab连接为一体，形成双Ab夹心法。

3.蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+-Ab-Ag-Ab-B-SA-磁珠复合体吸入流动测量室，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的Ab也被吸出测量室。

4.蠕动泵加入TPA，电极加电压，启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，其与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测Ag的含量。

四、方法评价

1.标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易于测定

2.敏感度高，可达pg／ml或pmol水平

3.线性范围宽＞104

4.反应时间短，20min以内可完成测定

5.试剂稳定性好，2～5℃可保持一年以上