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改进蛋白酶K（39450-01-6）法提取环境微生物样品总DNA（Zhu S）
2014-08-14
来源：亚科官网
所 需 试 剂: 0.15M NaCl 0.1M EDTA 1% SDS
NaAc (3M, pH 5.2)
蛋白酶K溶液 20mg/ml (用无菌水配制) 溶菌酶溶液 50mg/ml (用无菌水配制) 液氮
实验步骤：
(1) 将适量环境样品（如土壤或污泥）装入1.5 ml Eppendorf管； (2) 加入1 ml 0.15M NaCl-0.1M EDTA；
(3) 加入溶菌酶（sigma）至终浓度为2mg/ml并置于37℃水浴中温育1h； (4) 冻融三个循环（液氮3 min-65℃干热器3min）；
(5) 分别加入蛋白酶K溶液和SDS至终浓度为0.02和0.5%（wt / vol每一百ml 溶液中溶质克数），65℃温育1h；
(6) 裂解液依次用等体积的酚、酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）、氯仿抽提； (7) 加入1/4体积的NaAc (3M, pH 5.2)和2体积冷的纯乙醇沉淀核酸；－20℃放置1h；
(8) 离心收集12000prm，10min，回收DNA沉淀； (9) DNA沉淀用70%乙醇和无水乙醇洗涤后风干； (10) 每管加入30-50ulTE(Tris-HCl缓冲液)回溶及电泳检测，－20℃保存。
注：这种方法比较适合提取土壤环境微生物样品的总DNA。因为本法没有利用机械力量破碎细胞，因而所提取到的总DNA受机械剪切的程度较少，故用这种方法提出的DNA进行PCR扩增，其产物通常含有较少的嵌合体（chimera）。
苏州亚科科技股份有限公司编辑
