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常用的电泳缓冲液有哪些，如何配制
2019-05-17
来源：亚科官网
电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成，是电泳场中的导体，也是维持电泳系统恒定 pH值的必要条件。它是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。
电泳缓冲液的作用
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时阳极与阴极都会发生电解反应，阳极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，阴极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使阳极变酸，阴极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两极的pH保持基本不变。
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+等离子，防止电泳时激活DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
电泳缓冲液的配制方法
1、MOPS
MOPS Buffer，即3-吗啉丙磺酸缓冲液，属于生物缓冲剂，可作为二维凝胶电泳中等电聚焦电泳（IEF）的电解质系统成分；还可应用于Northern杂交，作为RNA的分离和转膜时的缓冲液。
常用的10×MOPS Buffer配制方法如下：
（1）称量41.8 g MOPS，溶解于约700mL DEPC处理水中；
（2）使用2 N NaOH 调节pH值至7.0；
（3）向溶液中加入DEPC处理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL；
（4）定容至1 L，用0.45 μm 滤膜过滤除去杂质，室温避光保存。
2、TAE
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种（TAE和TBE）缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。
50×TAE Buffer 配制方法：
1。称量Tris 242g，EDTA 18.612g于1L烧杯中；
2。向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀；
3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；
4。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。
使用时稀释50倍或100倍 即1×TAE Buffer 或 0.5×TAE。
3、TBE
TBE（Tris硼酸），是一种PCR技术中用到的缓冲液。
TBE配方：
1、使用液（0.5×）
0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，溶液体积为1L。
2、浓贮存液（5×）
54gTris碱 27.5g硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，NaOH调pH至8.0，溶液体积1L。
相关链接：MOPS
