免疫诊断试剂制备的特点

免疫诊断试剂是诊断试剂中品种最多的，在临床诊断领域应用十分广泛，主要用于传染性疾病检测、内分泌检测、肿瘤检测、孕检等，也可用于药物检测。免疫诊断试剂生产采用的工艺包括反应板或固相载体的选择、抗原抗体的筛选、标记物的筛选标记、显色剂及示踪剂等溶液的配制、校准品的配制与校准等环节，每个环节具有不同的特点及注意事项，接下来小编将以癌胚抗原（CEA）酶联免疫法为例予以说明。

酶联免疫法的核心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测，所以固相载体、抗原抗体及显色剂的选择尤为重要。聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等物质都可作为固相载体，形式通常为凹孔平板、试管、珠粒等。

关于校准品的配制，利用小牛血清作为基质来配制校准品。即向小牛血清中加入CEA抗原，配制不同浓度梯度的系列校准品。需要注意的是，校准品的配制要参考CEA的人群分布浓度及不同原理的线性范围，另外，校准品的调试与定值需要通过试验反复进行。

其次，关于标记物（酶标记抗体）要选择适宜的标记底物，还要注意标记浓度。以不同的CEA抗体做HRP（辣根过氧化物酶）标记并进行免疫分析，比较各种标记物零标准的OD（光密度）值、标准曲线形状，择优选择抗体为标记底物。制备标记物时，HRP与CEA的量采用不同的重量比，分别建立标准曲线进行比较，并筛选标记物质量较佳的标记条件。分析中，标记物相对于抗原所需是过量的，需通过耐量试验选择适宜浓度。

对于显色剂的选择，要求价廉、安全、有明显的显色反应且本身无色。TMB和ABTS是当前应用普遍且效果好的酶免显色底物。TMB具有高灵敏度，高稳定性、安全性等优点,TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，通过标准曲线计算样品中人癌胚抗原浓度。ABTS用于酶联免疫实验，产生一种可溶性的显绿色的螯合物，可使用405 nm光谱读取OD值，可使用1%SDS终止反应。

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    ABTS