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TTC和MTT有什么区别?TTC法和MTT法都有哪些应用?
氯化三苯基四氮唑(TTC)和噻唑蓝(MTT)都是常用的检测试剂,是检测微生物活性最常用的显色剂。TTC和MTT之间有什么联系,各自有哪些特点,在性质和应用方面有哪些区别呢?本文将详细介绍TTC和MTT的区别。
TTC,全称氯化三苯基四氮唑,又称红四氮唑,CAS号:298-96-4,外观为白色至浅黄色结晶粉末。
MTT,即噻唑蓝,又称蓝四氮唑,CAS号:298-93-1,外观为黄色或橙黄色粉末。
TTC和MTT之间的联系:TTC和MTT都属于四氮唑盐,是可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。TTC和MTT结构类似,显色原理也相同:主要是由活的微生物细胞的琥珀酸脱氢酶等脱氢酶类,将其还原为水不溶性的有颜色的甲臜产物。
TTC和MTT的区别:
TTC是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,还原产物为深红色三苯甲臜,该产物比较稳定,不溶于水且不易被空气中存在的氧气氧化,可起到持久的显色作用,在480~490nm波长处有最大吸收。
MTT易被水溶解和透过细胞膜而进入细胞内,可被活细胞内的琥珀酸脱氢酶还原产生为蓝紫色的双甲臜晶体,该结晶可溶于酸性异丙醇、二甲亚砜、SDS等有机溶剂中,通过多孔扫描分光光度计依颜色深浅可测定出各吸光度值,在550nm波长处有最大吸收。
TTC法和MTT法的应用
TTC常用作分析试剂和色谱分析试剂,TTC法在生物化学、药物科学、医学、农业、含高能材料、汽车工业和摄影等领域具有广泛的应用。具体应用有:
(1)用于菌落总数的测定,如测定乳及乳制品中菌落总数、区分化妆品中颗粒与菌落;
(2)用于鉴定细胞活力,主要用于鉴定植物种子、根系以及来鉴定植物种子的活力;
(3)用于药物分析,检测药物含量,比如检测氢化可的松、地塞米松等。
MTT法由于具有简便、快速、经济、不使用同位素等优点,广泛应用于生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。具体应用有:
(1)用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等常见细菌的活菌数量;
(2)用于测定中草药提取物体外抗肿瘤活性;
(3)用于观察弓形虫体细胞在胡桃楸提取物作用下的增殖状态,辅助其抗弓形虫效果。
综上,TTC和MTT都是性能优异、应用广泛的显色剂,需要注意的是,TTC和MTT最好现用现配,不宜久藏。另外TTC的还原产物三苯甲臜对皮肤和眼睛有一定的刺激作用,不能与皮肤直接接触;而MTT有致癌性,使用时也要小心做好防护。