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核酸提取中盐酸胍、异硫氰酸胍、蛋白酶K的作用
2020-06-15
来源:亚科官网
核酸提取是指利用物理、化学等方法将核酸从样品中分离出来的过程。分离得到高质量的核酸是分子生物学研究的关键步骤。盐酸胍、异硫氰酸胍和蛋白酶K都具有使蛋白质变性的作用,在核酸提取中有广泛的应用。本文将介绍盐酸胍、异硫氰酸胍和蛋白酶K这三种化学试剂在核酸提取中的作用。
盐酸胍,CAS号:50-01-1,是一种白色结晶粉末。盐酸胍是核酸酶的强抑制剂,但并不是强变性剂,它在核酸提取中的主要作用是使蛋白质变性并抑制酶活性。盐酸胍能够快速破坏细胞膜,使得蛋白质变性沉淀,从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕。
异硫氰酸胍,CAS号:593-84-0,是一种白色结晶性粉末。异硫氰酸胍是一类强力的蛋白质变性剂,无RNA酶和DNA酶活性。在核酸提取中,异硫氰酸胍能够迅速破碎细胞或病毒释放核酸,抑制细胞释放出的核酸酶,保证核酸一级结构的完整性。
蛋白酶K,CAS号:39450-01-6,是一种冻干粉末。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,具有强力降解和消化蛋白质的作用。在核酸提取中,蛋白酶K能够消化与DNA相结合的蛋白,使DNA释放并溶解于溶液中。值得一提的是,蛋白酶K在多种能够使蛋白质变性的化学试剂,如SDS、尿素、EDTA螯合剂及巯基试剂(如胰蛋白酶抑制剂或糜蛋白酶抑制剂))中均可以稳定存在并具有溶解蛋白质的能力。
盐酸胍和异硫氰酸胍是核酸提取裂解液中的常见胍盐,不仅能够提供高盐环境,而且具有灭活核酸酶,释放核酸,保护核酸分子的作用。蛋白酶K也常用于裂解液中,根据公开报道,在有些核酸提取方法,如磁珠提取法中,可与盐酸胍或异硫氰酸胍共同存在,起到加强液的作用。