几种蛋白酶K活力测定方法

蛋白酶K具有稳定的结构、极高的酶活力和广泛的底物特异性，广泛用于分子生物学和细胞生物学等领域的相关实验以及工业、农业等行业。本文将介绍几种可用于检测蛋白酶K活力的方法。

福林酚法

该方法是测定蛋白酶活力的常用方法，原理是福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色（钼蓝和钨蓝混合物），由于蛋白质分子中含有汗酚基的氨基酸（如络氨酸、色氨酸等），可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。因此可利用此原理测定蛋白酶活力。

在一定的温度和 pH 条件下，该蛋白酶K以酪蛋白或变性血红蛋白为底物，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤去除络蛋白等沉淀物后取上清液，经碱化后，再加入福林酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成的产物络氨酸量成正比，于680 nm 处测定每分钟内产生的相当于酪氨酸的显色呈 Folin 阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量（μmol）。

紫外分光光度法 

紫外分光光度法是以酪蛋白为底物，在55 ℃，pH 8.0 的 0.01 mol/L Tris-HCl 缓冲液中，于275 nm波长处测定1min内蛋白酶K水解酪蛋白产生的L-酪氨酸的量（μg）。

考马斯亮蓝法

该方法测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。该法以酪蛋白或牛血清白蛋白为底物，在一定温度和pH条件下，蛋白酶K水解酪蛋白或牛血清白蛋白，染料考马斯亮蓝 G-250与未被水解的蛋白质形成蓝色络合物，在595 nm 处可快速测定，从而得到蛋白酶K酶活力。

以上三种方法是常用的蛋白酶活力测定方法，用于测定蛋白酶K酶活力，有利于评判和比较不同厂家提供的蛋白酶K活力，便于人们选择和使用蛋白酶K。

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