Tris|77-86-1|在新型冠状病毒检测试剂盒中的应用

三羟甲基氨基甲烷(简称Tris，又名氨丁三醇)是一种重要的生物缓冲剂， 25℃下的pKa为8.06，pH缓冲范围：7.0-9.0，广泛应用于生物化学、分子生物学等领域中缓冲液的制备。CN111551743A 专利中，介绍了Tris在新型冠状病毒检测试剂盒中的应用。该试剂盒由6部分组成，具体为：发光底物液A、发光底物液B、样品稀释液、酶标工作液、校准品和磁珠悬浮液。接下来小编简述一下该试剂盒各组分的构成及制备方法。

1.发光底物液A

发光底物液A由Tris，盐酸和鲁米诺三部分组成；

制备方法：称取各组分，分别溶于蒸馏水中，定容，即得；其中Tris 0.01-0.05g/L，盐酸0.002-0.01ml/L，鲁米诺0.001-0.007g/L；

2.发光底物液B

发光底物液B由磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，过氧化脲和氯化钠四部分组成；

制备方法：称取各组分，分别溶于蒸馏水中，定容，即得；其中磷酸二氢钠0.1-0.5g/L，磷酸氢二钠2.0-4.0g/L，过氧化脲0.002-0.05g/L，氯化钠3-15g/L。

3.样品稀释液

样品稀释液由BSA(牛血清白蛋白)，氯化钠和ProCLin300三部分组成。

制备方法：称取各组分，分别溶于蒸馏水中，定容，即得；其中BSA 8-15g/L，氯化钠5-12g/L，ProCLin300 0.1-1ml/L；

4.酶标工作液

酶标工作液由辣根过氧化物酶标记的新型冠状病毒抗原(nCov-Ag-HRP)，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，氨基比林，ProCLin300和CaSein(酪蛋白)六部分组成。

制备方法：称取各组分，分别溶于蒸馏水中，定容，即得。其中nCov-NAg-HRP 0.3-1.0mg/L，nCov-SAg-HRP 0.8-1.5mg/L，磷酸二氢钠0.05-0.4g/L，磷酸氢二钠2.0-4.0g/L，氨基比林0.2-1.5g/L，ProCLin300 0.1-1.0ml/L，CaSein(酪蛋白)1.0-4.0g/L；

5.校准品

本发明专利所用校准品为人源性血清。

6.磁珠悬浮液

磁珠悬浮液包括偶联有抗人IgM抗体的磁微粒。

制备方法：称取磁微粒，用碳二亚胺(EDC)活化，加入抗人IgM抗体，混悬，清洗，定容。偶联有抗人IgM抗体的磁微粒(以磁微粒的质量计)0.2-2g/L，其中，1g磁微粒上偶联有1-2g 的抗人IgM抗体；

使用以上方法制备的试剂盒有以下有益效果：

①该试剂盒将新型冠状病毒的N蛋白和S蛋白片段共同作为抗原，二者联合使用提高了试剂盒的检出率、灵敏度和特异性。

②该试剂盒对磁微粒上偶联的抗人IgM抗体的种类进行了特定选择，结果发现鼠抗人IgM抗体用于本发明具有相对更好的效果，阳性检出率更高。

参考文献

CN111551743A，北京贝尔生物工程股份有限公司.