Tricine|CAS:5704-04-1|在狂犬病疫苗中的应用

三（羟甲基）甲基甘氨酸（又名N-[3(羟基甲基)甲基]甘氨酸，CAS:5704-04-1，英文简称Tricine）是一种优良的两性生物good's缓冲剂。Tricine的主要用途是能够有效抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母菌及霉菌，同时也是许多疫苗培养基的PH值稳定剂，CN111840535B 专利中介绍了Tricine在狂犬病疫苗中的应用，其中Tricine在该专利中是无血清培养基的成分，主要作为pH值稳定剂，本周亚科股份小编介绍一下该狂犬病疫苗具体的制备工艺，具体如下：

原液制备

1.细胞培养：在生物反应器内无血清培养基灌流培养Vero细胞至0.6～0.7×10⁷cells/ml，开始病毒接种，其中Vero细胞无血清培养液配方包含谷丙二肽2～4mmol/L，果糖0.5～2.0g/L，Tricine 0.5～2.0g/L。

2.病毒接种：将狂犬病病毒rPV-2061按0.0025～0.01MOI接种到细胞，培养6h以上，开始使用无血清病毒维持液灌流培养，其中Vero细胞无血清维持液配方包含谷丙二肽2～4mmol/L，果糖0.5～2.0g/L，Tricine 0.5～2.0g/L，碳酸氢钠2～3g/L。

3.收毒：病毒接种后，从第3-17天开始收获病毒，得病毒收获液。

4.灭活：使用β-丙内酯灭活病毒。

5.酶切：使用核酸酶对Vero细胞宿主DNA进行酶切。

6.纯化：分子筛层析纯化病毒，纯化后加入终浓度3％(m/v)人血白蛋白和终浓度5％(m/v)的麦芽糖作为稳定剂，配制成原液。

1.成品配制

（1）加入适量冻干保护剂作为稳定剂，得到半成品。

（2）将半成品分装及冻干后制备成成品。

专利中狂犬病疫苗产品无牛血清、动物源性胰酶、明胶及右旋糖酐等添加物，Vero细胞DNA和蛋白残留低，安全性高。并且，疫苗产品在37℃放置28天后效价仍可维持在6.6IU/剂以上，热稳定性高。另外，30L生物反应器每罐可生产16万剂，工艺生产效率高。

参考文献

CN111840535B利用无血清Vero细胞和狂犬病病毒rPV-2061制备狂犬病疫苗的工艺.