Structure Search

    Search

    Online Support

  •  Customer service

    Location: Technique Support

几种底物液配制方法参考

2011-01-11 来源:亚科官网

1.甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐:

试剂配制:

(1)0.15mol/L Tris-双甘肽缓冲液:Tris 1.8171g,双甘肽793.2mg,加水至80mL溶解,用1 mol/L HClpH8.6,再加水至100mL

(2)2mmol/L底物溶液:9.6mg甘氨酰脯氨酸对硝基苯酰胺对甲苯磺酸盐(MW=482.5)溶于10mL Tris-双甘肽缓冲液中;

(3)标本:静脉采血5mL,及时分离血清,-20保存待测。

 

2.对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG,用于糖尿病、肾功能检测)

底物液反应:以PNP-NAG为底物,在2.0ml的反应体系中,含0.1 mol/L NaAc-HAc缓冲液(pH5.2,0.25mmol/L PNP-NAG,加入50μl酶液,混匀在37下反应10min,加入2.0ml 0.5 mol/LNaOH终止反应后,于分光光度计上测定波长为405nm的光密度值,消光系数按1.73×104 mol/L·cm计算。(酶活力单位U定义:在上述条件下,每升溶液中每分钟释放1μmol NAG的量为1个酶活力单位。比活力定义:每毫克酶蛋白所具有的酶活力单位数。)

 

 

3.TOOS

反应试剂:4-AAP水溶液(10mM);供氢体溶液(TOOS)(10mM);过氧化氢溶液(0.45mM);过氧化脲溶液(0.45mM);尿素溶液 0.1 mM, 0.2 mM,0.5 mM,1 mM2 mM5 mM10mM);过氧化物酶溶液(100U/ml),由过氧化物酶(280U/mg)制备,溶液应冷藏;血清;缓冲液由Good’s缓冲试剂和氢氧化钠溶液制备,缓冲试剂pH范围:NES pH 5.5-6.5MOPS pH7.0HEPES pH7.5-8.5CAPS pH9.0-9.5

尿素浓度对显色影响实验:2.5ml 0.1MGood’s缓冲液(MOPSpH7.0),0.1ml 10mM4-AAP溶液,0.1ml 10mMTOOS溶液,0.1ml 0.45mM的过氧化氢溶液,0.1ml的过氧化物酶溶液和0.1ml不同浓度的尿素溶液(0.1–10mM),37℃孵育10分钟。 测定产生的有色溶液的吸收光谱,并对比空白试剂。

 

 

 



Copyright © 2010 SuZhou Yacoo Science Co., Ltd All Rights Reserved Powered by: Founder International
Yacoo Information Management Platform   用户登录   站内地图